Tinción de Gram

La tinción de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1844. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color violeta y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rojizo.



PROCEDIMIENTO

1.Recoger muestra estéril
2.Hacer el extendido en espiral
3.Dejar secar a temperatura ambiente
4.Fijar la muestra al calor (flameado 3 veces aprox.)
5.Agregar azul violeta (cristal violeta) y esperar 1 min. Este tinte dejará de color morado las bacterias Gram positivas.
6.Enjuagar con agua.
7.Agregar lugol y esperar 1 min
8.Enjuagar con agua.
9.Agregar alcohol y acetona y esperar 15 s
10.Enjuagar con agua.
11.Agregar safranina y esperar 30 s. Este tinte dejará de color rosado las bacterias Gram negativas.
12.Enjuagar con agua.


Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión